Gewebevorbereitung
Bevor ein Arzt das Gewebe zur Diagnose untersuchen kann, muss es zunächst präpariert und zur einfachen Betrachtung in Objektträger verwandelt werden.
Gewebefixierung
Die Fixierung des Gewebes ist der erste Schritt bei der Vorbereitung des Gewebes für einen Objektträger. Der Zweck dieses Schrittes ist es, den Abbau des Gewebes zu verhindern. Unmittelbar nach der Entnahme des Gewebes sollte es in ein Fixiermittel wie Formalin gegeben werden. Es gibt auch andere Möglichkeiten, aber die meisten Gewebeproben werden in einem 10%igen neutral gepufferten Formalin fixiert. Nach 24-48 Stunden ist das Gewebe fixiert und bereit für den nächsten Schritt.
Probentransfer zu Kassetten
Nachdem das Gewebe fixiert wurde, wird es mit einem Skalpell zugeschnitten und in eine beschriftete Gewebekassette eingelegt. Eine Gewebekassette ist eine Einweg-Plastikstruktur, die zur Aufnahme von Gewebeproben verwendet wird. Die Kassetten passen in Mikrotom-Futteradapter und sind so konzipiert, dass die Proben während der Verarbeitung sicher aufbewahrt werden.
Gewebeverarbeitung
Die erste Phase der Gewebeverarbeitung umfasst die Dehydrierung, bei der das Gewebe in zunehmende Konzentrationen von Alkohol getaucht wird, damit Wasser und Formalin entfernt werden können. Anschließend wird das Gewebe in einem organischen Lösungsmittel gespült, um den Alkohol zu entfernen und das Gewebe für die Einbettungsphase vorzubereiten. Während der Einbettungsphase wird die Gewebeprobe mit geschmolzenem Paraffin umhüllt, um einen in Formalin fixierten, in Paraffin eingebetteten (FFPE) Block herzustellen. Sobald der Block erstarrt ist, kann er geschnitten werden.
Sektionierung
Das Wachs wird von der Oberfläche des Blocks entfernt, um das Gewebe freizulegen, das dann 10 Minuten lang gekühlt wird. Mit einem Mikrotom werden dünne Gewebeschnitte hergestellt, die vorsichtig in ein warmes Wasserbad gelegt werden. Anschließend werden sie auf einen Objektträger unter den Wasserspiegel gelegt. Die Objektträger werden dann aufrecht gestellt und einige Stunden lang bei 37 °C getrocknet, damit das überschüssige Paraffin schmelzen kann.
Färben
Die Färbung wird verwendet, um transparente Zellen leicht sichtbar zu machen. Anschließend wird ein Deckglas auf die Gewebeprobe aufgelegt und sorgfältig festgeklebt.
Nach der Entnahme von Gewebe werden die Proben sorgfältig behandelt und gelagert, um die Qualität zu erhalten. Werden die Gewebeproben nicht ordnungsgemäß gelagert, kann es zu einem Zellverfall kommen, der die Forschungsergebnisse beeinträchtigt. Die Vorbereitung für die Lagerung hängt in der Regel von den spezifischen Anforderungen ab, z. B. von der Größe, dem Schnitt oder dem Zweck des Gewebes. Ein medizinischer Pathologe stellt sicher, dass die Probe während der gesamten Aufbereitung gelagert wird, damit die Qualität erhalten bleibt.
Wenn eine Probenstudie abgeschlossen ist, wird das Gewebe als Kassette, Objektträger oder Block in eine Speicherbank gelegt. Aufzeichnungen, einschließlich Spenderinformationen, Einverständniserklärungen und Zeitpunkt der Gewebeentnahme, werden aufbewahrt, falls Forschungsteams erneut auf die Gewebeprobe zugreifen müssen.
Bedingungen für die Gewebelagerung
Lagerbehälter und Probengröße
Gewebeproben sollten in Lagerbehältern aufbewahrt werden, die strukturell stabil sind und die Stabilität bei eiskalten Temperaturen gewährleisten. Das Einfrieren und Auftauen der Proben sollte auf ein Minimum beschränkt werden, um das Einbringen von Verunreinigungen oder die Beschädigung biologischer Marker zu vermeiden, die eine Analyse unzuverlässig machen würden. Es wird empfohlen, die Gewebeproben in kleinere Portionen aufzuteilen und in separaten Behältern einzufrieren, um diese Möglichkeiten zu verringern. Es gibt keine "Mindestgröße", die für die Lagerung empfohlen wird. Die beste Praxis ist, dass die Proben eine für den Lagerraum und die Ressourcen der Einrichtung angemessene Größe haben sollten.
Hochdichte Einlegeböden erhöhen die Schrankkapazität für die Lagerung von Kassetten, Objektträgern oder Paraffinblöcken. Die meisten Labore benötigen mehr Platz für die Lagerung von Gewebe. Für die Lagerung von Gewebe und Paraffinblöcken eignen sich besonders gut Schränke mit hoher Dichte, die so konzipiert sind, dass nur wenig Platz verschwendet wird. Schränke mit hoher Dichte können so angepasst werden, dass Paraffinblöcke ineinander gestapelt werden können und in den Schränken Platz finden, ohne dass zusätzlicher Raum zwischen ihnen entsteht. Geeignete Lagerschränke reichen bis zum oberen Ende eines Lagerraums, um Platzverschwendung über Kopf zu vermeiden. Die Lagerung von Tissue durch Paraffinblöcke in einem Schrank macht es einfach, eine größere Menge an Tissue ohne Komplikationen zu lagern.
Temperatur
Bei der Lagerung muss die Temperatur so gewählt werden, dass die Unversehrtheit der Zellen erhalten bleibt und ein Abbau verhindert wird. Die meisten Gewebebanken lagern Proben bei -70℃ oder niedriger in ultrakalten Gefriergeräten wie dem Stirling Ultracold SU780XLE oder SU105UE für längere Zeit. Gewebeproben sollten niemals in selbstabtauenden Gefriergeräten aufbewahrt werden, da die Proben sonst Gefrierbrand bekommen können. Die Proben können entweder in Trockeneis oder in einem tragbaren ultrakalten Gefriergerät wie dem ULT25NEU transportiert werden.
