Preparación de tejidos
Antes de que un médico pueda examinar el tejido para su diagnóstico, primero debe prepararlo y convertirlo en portaobjetos de microscopio para facilitar su visualización.
Fijación de tejidos
La fijación de tejidos es el primer paso en la preparación del tejido para un portaobjetos de microscopio. El objetivo de este paso es evitar la degradación del tejido. Inmediatamente después de recoger el tejido, debe transferirse a un fijador como la formalina. Existen otras opciones, pero la mayoría de las muestras de tejido se fijan en formol neutro tamponado al 10%. Después de 24-48 horas, el tejido estará fijado y listo para el siguiente paso.
Transferencia de muestras a casetes
Una vez fijado el tejido, se recorta con un bisturí y se introduce en un casete de tejido etiquetado. Un casete de tejido es una estructura de plástico desechable que se utiliza para guardar muestras de tejido. Los casetes encajan en adaptadores de mandril de microtomo y están diseñados para mantener seguras las muestras durante el procesamiento.
Procesamiento de tejidos
La primera fase del procesamiento de tejidos consiste en la deshidratación, en la que el tejido se sumerge en concentraciones crecientes de alcohol para poder eliminar el agua y el formol. A continuación, el tejido se enjuaga en un disolvente orgánico para eliminar el alcohol y prepararlo para la fase de incrustación. Durante la fase de incrustación, la muestra de tejido se cubre con cera de parafina fundida para crear un bloque fijado con formalina e incrustado en parafina (FFPE). Una vez que el bloque se ha solidificado, está listo para ser seccionado.
Seccionamiento
Se retira la cera de la superficie del bloque para exponer el tejido, que se enfría durante 10 minutos. Se utiliza un micrótomo para crear finas láminas de tejido, que se transfieren cuidadosamente a un baño de agua caliente. A continuación, se colocan en un portaobjetos bajo el nivel del agua. Los portaobjetos se colocan en posición vertical y se dejan secar a 37℃ durante unas horas para que se derrita el exceso de parafina.
Tinción
La tinción se utiliza para facilitar la visualización de las células transparentes. A continuación, se coloca un cubreobjetos sobre la muestra de tejido y se pega con cuidado.
Una vez adquiridos los tejidos, las muestras se manipulan y almacenan cuidadosamente para mantener su calidad. Si las muestras de tejido no se almacenan correctamente, puede producirse una degradación celular que altere los resultados de la investigación. La preparación para el almacenamiento suele depender de requisitos específicos, como el tamaño, el corte o la finalidad del tejido. Un patólogo médico se asegura de que la muestra se almacene durante toda la preparación para garantizar que la calidad permanezca intacta.
Si se completa un estudio de muestras, el tejido se coloca en un banco de almacenamiento en forma de casete, portaobjetos o bloque. Los registros, incluidos los datos del donante, los formularios de consentimiento y la fecha de recogida del tejido, se conservan por si los equipos de investigación necesitan acceder de nuevo a la muestra de tejido.
Condiciones de almacenamiento de tejidos
Contenedores de almacenamiento y tamaño de las muestras
Las muestras de tejido deben almacenarse en recipientes estructuralmente estables y que garanticen la estabilidad a temperaturas de congelación. La congelación y descongelación de las muestras debe ser mínima para evitar introducir contaminantes o dañar los marcadores biológicos, lo que haría que los análisis no fueran fiables. Se recomienda dividir las muestras de tejido en porciones más pequeñas y congelarlas en recipientes separados para reducir estas posibilidades. No existe un "tamaño mínimo" recomendado para el almacenamiento. La mejor práctica es que la muestra tenga un tamaño razonable para el espacio de almacenamiento y los recursos de la instalación.
Los estantes de alta densidad aumentan la capacidad del armario para el almacenamiento de casetes, portaobjetos de microscopio o bloques de parafina. La mayoría de los laboratorios necesitan más espacio en los armarios para el almacenamiento de tejidos. Los armarios de alta densidad adaptados para dejar poco espacio desaprovechado son excelentes para almacenar tejidos y bloques de parafina. Los armarios de alta densidad pueden ajustarse para que los bloques de parafina se apilen y se coloquen en armarios sin espacio añadido entre ellos. Los armarios de almacenamiento adecuados se extenderán hasta la parte superior de un almacén para evitar el desperdicio de espacio superior. El almacenamiento de tejidos mediante bloques de parafina en un armario facilita la gestión de un mayor almacenamiento sin complicaciones.
Temperatura
La temperatura de almacenamiento debe ser coherente con el mantenimiento de la integridad celular y la prevención de la degradación. La mayoría de los bancos de tejidos almacenan las muestras a -70℃ o menos en congeladores Stirling Ultracold como el Stirling Ultracold SU780XLE o el SU105UE durante periodos más largos. Las muestras de tejido nunca deben almacenarse en congeladores autodescongelantes, ya que pueden quemarse. Las muestras pueden transportarse en hielo seco o en un ultracongelador portátil como el ULT25NEU.
