Requisitos de las células de congelación y descongelación

Las líneas celulares establecidas son un recurso valioso para los laboratorios de investigación. Sin embargo, incluso las líneas celulares mejor conservadas en un cultivo continuo pueden ser susceptibles a la deriva genética, la senescencia y la contaminación microbiana. Por ello, las células deben congelarse y conservarse para su almacenamiento a largo plazo.

A continuación se exponen algunas directrices esenciales para la congelación de células. Al igual que con todos los procedimientos de cultivo celular, lo mejor es seguir las instrucciones proporcionadas con su línea celular para obtener resultados óptimos.

  • Asegúrese de que las células son viables al menos en un 90% y en una concentración elevada antes de la congelación. Asegúrese de seguir las instrucciones de congelación óptimas basadas en la línea celular utilizada.
  • Utiliza un criocongelador de velocidad controlada para congelar las células lentamente reduciendo la temperatura a 1 grado por minuto.
  • Utilice siempre el medio de congelación recomendado, como DMSO o glicerol. Si es la primera vez que se congelan células primarias o líneas celulares, se recomienda el uso de un medio de congelación optimizado específico para células, como la familia de medios de congelación BioLife CryoStor®.
  • Todas las soluciones y equipos que entran en contacto con las células deben ser estériles, incluidos los crioviales utilizados para almacenar las células congeladas.

La descongelación de células congeladas puede ser un procedimiento complicado en el que es esencial ser rápido y preciso para garantizar la supervivencia de la mayoría de las células. Para obtener el mejor resultado posible, se recomienda seguir al pie de la letra las instrucciones dadas con las células y otros componentes. Para obtener los mejores resultados, siga estas directrices:

  • Descongele rápidamente las células en un baño de agua a 37 °C hasta que se haya derretido todo el hielo visible.
  • Antes de incubar las células, dilúyalas utilizando un medio de crecimiento precalentado
  • Para mejorar la recuperación, la placa de las células descongeladas a alta densidad
  • Trabaje en una campana de flujo laminar y utilice siempre la técnica aséptica correcta
  • Llevar equipo de protección personal, como mascarilla o gafas (los crioviales que se conservan en fase líquida podrían explotar al descongelarse).
  • Algunos medios de congelación contienen DMSO, que facilita el proceso de entrada de moléculas orgánicas en los tejidos. Asegúrese de utilizar equipos para manipular los productos químicos que contengan DMSO.
  • BioLife Cell Thawing Media es eficaz para grandes volúmenes de sangre de placenta/cordón umbilical criopreservada en bolsas de DMSO.

Materiales necesarios para descongelar las células

Proceso paso a paso para descongelar células congeladas

  1. Empiece por retirar el criovial que contiene las células congeladas del almacenamiento en nitrógeno líquido o del congelador ultrafrío.
  2. Coloque el vial de células en un baño de agua a 37 °C y remuévalo suavemente hasta que sólo quede una pequeña cantidad de hielo. Alternativamente, utilice un instrumento automatizado de descongelación celular como el BioLife ThawSTAR® CFT1.5 o CFT2 introduciendo el vial criogénico congelado en el dispositivo. Recupérelo cuando el vial se levante al final del ciclo de descongelación y proceda.
  3. Tenga en cuenta que es importante reducir la exposición a la temperatura ambiente cuando saque las células congeladas del almacén. Si las células no se van a utilizar inmediatamente, colóquelas en hielo seco o en un recipiente de nitrógeno líquido. Las células en crioviales de 1,8 mL y 2,0 mL pueden transportarse desde el almacenamiento congelado hasta el dispositivo de descongelación dentro del BioLife ThawSTAR® CFT Transporter mientras están congeladas en hielo seco. Alternativamente, los crioviales que contienen células pueden transferirse congelados a <-150℃ dentro del BioT™ LN2 Transporter, que contiene nitrógeno líquido de forma segura dentro de una almohadilla absorbente/baffle.
  4. Mueva el vial a una campana de flujo laminar.
  5. Limpie el exterior del vial con etanol o isopropanol al 70%.
  6. Transfiera la cantidad preferida de medio de crecimiento completo precalentado apropiado para su línea celular a las células descongeladas. Las células descongeladas y congeladas en crioviales suelen pipetearse desde el pequeño criovial a un tubo de centrífuga que contiene un medio de crecimiento precalentado.
  7. Centrifugar la suspensión celular a 200 x g durante unos 5-10 minutos a temperatura ambiente. La velocidad y la duración del centrifugado variarán en función de los tipos celulares.
  8. Una vez finalizada la centrifugación, compruebe la claridad del sobrenadante, así como la visibilidad de un pellet completo.
  9. Sin perturbar el pellet, vierta gradualmente el sobrenadante.
  10. Retire el sobrenadante con una pipeta y deje una pequeña cantidad de medio para garantizar que no se interrumpe el sedimento celular.
  11. Golpee con cuidado el tubo para volver a suspender el sedimento celular.
  12. Trasládelos a su recipiente de cultivo celular adecuado, así como al entorno de cultivo celular sugerido.
  13. Ahora las células están listas para su uso en aplicaciones posteriores.