Preparazione dei tessuti
Prima che il medico possa esaminare il tessuto per la diagnosi, è necessario prepararlo e trasformarlo in vetrini da microscopio per facilitarne la visualizzazione.
Fissazione dei tessuti
La fissazione dei tessuti è la prima fase della preparazione del tessuto per il vetrino del microscopio. Lo scopo di questa fase è quello di prevenire la degradazione del tessuto. Subito dopo il prelievo, il tessuto deve essere trasferito in un fissativo come la formalina. Sono disponibili altre opzioni, ma la maggior parte dei campioni di tessuto viene fissata in formalina neutra tamponata al 10%. Dopo 24-48 ore, il tessuto sarà fissato e pronto per la fase successiva.
Trasferimento dei campioni alle cassette
Una volta che il tessuto è stato fissato, viene tagliato con un bisturi e inserito in una cassetta di tessuto etichettata. Una cassetta per tessuti è una struttura di plastica monouso utilizzata per contenere i campioni di tessuto. Le cassette si inseriscono negli adattatori del mandrino del microtomo e sono progettate per mantenere i campioni al sicuro durante la lavorazione.
Trattamento dei tessuti
La prima fase del trattamento dei tessuti prevede la disidratazione, in cui il tessuto viene immerso in concentrazioni crescenti di alcol in modo da rimuovere l'acqua e la formalina. Successivamente, il tessuto viene risciacquato in un solvente organico per rimuovere l'alcol e prepararlo alla fase di inclusione. Durante la fase di inclusione, il campione di tessuto viene ricoperto di cera di paraffina fusa per creare un blocco di paraffina fissata in formalina (FFPE). Una volta solidificato, il blocco è pronto per essere sezionato.
Sezionamento
La cera viene rimossa dalla superficie del blocco per esporre il tessuto, che viene poi raffreddato per 10 minuti. Con un microtomo si creano fette di tessuto sottili, che vengono trasferite con cura in un bagno di acqua calda. Successivamente, vengono posizionate su un vetrino sotto il livello dell'acqua. I vetrini vengono quindi posizionati in verticale e lasciati asciugare a 37℃ per alcune ore per consentire alla paraffina in eccesso di sciogliersi.
Colorazione
La colorazione viene utilizzata per consentire una facile visualizzazione delle cellule trasparenti. Un coprioggetto viene quindi montato sul campione di tessuto e incollato con cura.
Una volta acquisiti i tessuti, i campioni vengono maneggiati e conservati con cura per mantenere la qualità. Se i campioni di tessuto non vengono conservati correttamente, si può verificare una degradazione delle cellule che altera i risultati della ricerca. La preparazione per la conservazione dipende solitamente da requisiti specifici, tra cui le dimensioni, il taglio o lo scopo del tessuto. Un patologo medico si assicura che il campione sia conservato per tutta la durata della preparazione per garantire che la qualità rimanga intatta.
Se lo studio di un campione viene completato, il tessuto viene collocato in una banca di conservazione sotto forma di cassetta, vetrino o blocco. I registri, compresi i dati dei donatori, i moduli di consenso e la data di raccolta del tessuto, vengono conservati nel caso in cui i team di ricerca abbiano bisogno di accedere nuovamente al campione di tessuto.
Condizioni di conservazione dei tessuti
Contenitori e dimensioni dei campioni
I campioni di tessuto devono essere conservati in contenitori strutturalmente stabili e che garantiscano la stabilità alle temperature di congelamento. Il congelamento e lo scongelamento dei campioni devono essere ridotti al minimo per evitare l'introduzione di contaminanti o il danneggiamento dei marcatori biologici, che renderebbero inaffidabile l'analisi. Si raccomanda di dividere i campioni di tessuto in porzioni più piccole e di congelarli in contenitori separati per ridurre queste possibilità. Non esiste una "dimensione minima" raccomandata per la conservazione. La prassi migliore è che i campioni siano di dimensioni ragionevoli per lo spazio di conservazione e le risorse della struttura.
I ripiani ad alta densità aumentano la capacità dell'armadio per la conservazione di cassette, vetrini per microscopio o blocchi di paraffina. La maggior parte dei laboratori ha bisogno di più spazio per la conservazione dei tessuti. Gli armadi ad alta densità, studiati su misura per lasciare poco spazio sprecato, sono eccellenti per la conservazione di tessuti e blocchi di paraffina. Gli armadi ad alta densità possono essere regolati in modo che i blocchetti di paraffina siano impilati e sistemati negli armadi senza spazio aggiuntivo tra loro. Gli armadi di stoccaggio adeguati si estendono fino alla parte superiore del magazzino per evitare lo spreco di spazio in alto. La conservazione dei tessuti attraverso i blocchetti di paraffina in un armadietto consente di gestire facilmente l'aumento dello stoccaggio senza complicazioni.
Temperatura
La temperatura di conservazione deve essere coerente con il mantenimento dell'integrità cellulare e la prevenzione della degradazione. La maggior parte delle banche dei tessuti conserva i campioni a -70℃ o meno in congelatori ultrafreddi come Stirling Ultracold SU780XLE o SU105UE per periodi più lunghi. I campioni di tessuto non devono mai essere conservati in congelatori a scongelamento automatico per evitare che i campioni si brucino. I campioni possono essere trasportati in ghiaccio secco o in un congelatore ultrafreddo portatile come l' ULT25NEU.
