Préparation des tissus
Avant qu'un médecin puisse examiner le tissu pour établir un diagnostic, il doit d'abord être préparé et transformé en lames de microscope pour faciliter l'observation.
Fixation des tissus
La fixation des tissus est la première étape de la préparation des tissus pour une lame de microscope. L'objectif de cette étape est d'empêcher la dégradation du tissu. Immédiatement après avoir été prélevé, le tissu doit être transféré dans un fixateur tel que le formol. D'autres options sont disponibles, mais la plupart des échantillons de tissus sont fixés dans du formol tamponné neutre à 10 %. Après 24-48 heures, le tissu sera fixé et prêt pour l'étape suivante.
Transfert d'échantillons vers des cassettes
Une fois le tissu fixé, il est découpé à l'aide d'un scalpel et placé dans une cassette de tissu étiquetée. Une cassette de tissu est une structure en plastique jetable utilisée pour contenir des échantillons de tissu. Les cassettes s'insèrent dans les adaptateurs de mandrin de microtome et sont conçues pour conserver les échantillons en toute sécurité pendant le traitement.
Traitement des tissus
La première phase du traitement des tissus comprend la déshydratation, au cours de laquelle le tissu est immergé dans des concentrations croissantes d'alcool afin d'éliminer l'eau et le formol. Ensuite, le tissu est rincé dans un solvant organique pour éliminer l'alcool et préparer le tissu à la phase d'inclusion. Pendant la phase d'inclusion, l'échantillon de tissu est recouvert de cire de paraffine fondue pour créer un bloc fixé au formol et inclus dans la paraffine (FFPE). Une fois solidifié, le bloc est prêt à être sectionné.
Sectionnement
La cire est retirée de la surface du bloc pour exposer le tissu, qui est ensuite réfrigéré pendant 10 minutes. Un microtome est utilisé pour créer de fines tranches de tissu, qui sont soigneusement transférées dans un bain d'eau chaude. Elles sont ensuite placées sur une lame sous le niveau de l'eau. Les lames sont ensuite placées à la verticale et laissées à sécher à 37℃ pendant quelques heures pour permettre à l'excès de paraffine de fondre.
Coloration
La coloration est utilisée pour permettre aux cellules transparentes d'être facilement visualisées. Une lamelle couvre-objet est ensuite montée sur l'échantillon de tissu et soigneusement collée.
Une fois les tissus acquis, les échantillons sont manipulés et stockés avec soin pour en préserver la qualité. Si les échantillons de tissus ne sont pas correctement stockés, ils risquent de subir une dégradation cellulaire, ce qui altère les résultats de la recherche. La préparation au stockage dépend généralement d'exigences spécifiques, notamment de la taille, de la coupe ou de l'objectif du tissu. Un pathologiste médical veille à ce que l'échantillon soit stocké tout au long de la préparation afin de garantir que la qualité reste intacte.
Si l'étude d'un échantillon est terminée, le tissu est placé dans une banque de stockage sous la forme d'une cassette, d'une lame ou d'un bloc. Les dossiers, y compris les informations sur le donneur, les formulaires de consentement et la date à laquelle le tissu a été prélevé, sont conservés au cas où les équipes de recherche auraient besoin d'accéder à nouveau à l'échantillon de tissu.
Conditions de stockage des tissus
Récipients de stockage et taille des échantillons
Les échantillons de tissus doivent être conservés dans des conteneurs de stockage dont la structure est stable et qui garantissent la stabilité à des températures de congélation. La congélation et la décongélation des échantillons doivent être réduites au minimum afin d'éviter d'introduire des contaminants ou d'endommager les marqueurs biologiques, ce qui rendrait l'analyse peu fiable. Il est recommandé de diviser les échantillons de tissus en portions plus petites et de les congeler dans des récipients séparés afin de réduire ces risques. Il n'existe pas de "taille minimale" recommandée pour le stockage. La meilleure pratique est que le spécimen soit de taille raisonnable pour l'espace de stockage et les ressources de l'établissement.
Les étagères à haute densité augmentent la capacité de l'armoire de stockage pour les cassettes, les lames de microscope ou les blocs de paraffine. La plupart des laboratoires ont besoin de plus d'espace pour le stockage des tissus. Les armoires à haute densité, conçues pour laisser peu d'espace perdu, sont idéales pour le stockage des tissus et des blocs de paraffine. Les armoires à haute densité peuvent être réglées de manière à ce que les blocs de paraffine s'empilent les uns sur les autres et soient placés dans les armoires sans espace supplémentaire entre eux. Les armoires de stockage appropriées s'étendent jusqu'en haut de la salle de stockage afin d'éviter de gaspiller de l'espace au-dessus de la tête. Le stockage de tissus dans des blocs de paraffine dans une armoire permet d'augmenter le volume de stockage sans complications.
Température
La température de stockage doit être compatible avec le maintien de l'intégrité cellulaire et la prévention de la dégradation. La plupart des banques de tissus stockent les échantillons à -70℃ ou moins dans des congélateurs ultra-froids tels que le Stirling Ultracold SU780XLE ou SU105UE pour des durées plus longues. Les échantillons de tissus ne doivent jamais être conservés dans des congélateurs à dégivrage automatique, car ils risquent de subir des brûlures de congélation. Les échantillons peuvent être transportés dans de la glace sèche ou dans un congélateur ultra-froid portable tel que l' ULT25NEU.
