Preparação de tecidos
Antes de um médico poder examinar o tecido para diagnóstico, este tem de ser preparado e transformado em lâminas de microscópio para facilitar a visualização.
Fixação de tecidos
A fixação de tecidos é o primeiro passo na preparação do tecido para uma lâmina de microscópio. O objetivo deste passo é evitar a degradação do tecido. Imediatamente após a recolha do tecido, este deve ser transferido para um fixador como a formalina. Existem outras opções, mas a maioria das amostras de tecido são fixadas numa formalina neutra tamponada a 10%. Após 24-48 horas, o tecido estará fixado e pronto para o passo seguinte.
Transferência de amostras para cassetes
Depois de o tecido ter sido fixado, é cortado com um bisturi e colocado numa cassete de tecido rotulada. Uma cassete de tecido é uma estrutura de plástico descartável que é utilizada para guardar amostras de tecido. As cassetes encaixam em adaptadores de mandris de micrótomo e são concebidas para manter as amostras seguras durante o processamento.
Processamento de tecidos
A primeira fase do processamento de tecidos envolve a desidratação, na qual o tecido é imerso em concentrações crescentes de álcool para que a água e a formalina possam ser removidas. Em seguida, o tecido é lavado num solvente orgânico para remover o álcool e preparar o tecido para a fase de incorporação. Durante a fase de inclusão, a amostra de tecido é coberta com cera de parafina derretida para criar um bloco de inclusão em parafina fixada em formalina (FFPE). Uma vez solidificado, o bloco está pronto para ser seccionado.
Seccionamento
A cera é removida da superfície do bloco para expor o tecido, que é depois arrefecido durante 10 minutos. Um micrótomo é utilizado para criar fatias finas de tecido, que são cuidadosamente transferidas para um banho de água quente. Em seguida, são colocadas numa lâmina sob o nível da água. As lâminas são então colocadas na vertical e deixadas a secar a 37 ℃ durante algumas horas para permitir que o excesso de cera de parafina derreta.
Coloração
A coloração é utilizada para permitir que as células transparentes sejam facilmente visualizadas. Uma lamela é então montada sobre a amostra de tecido e cuidadosamente colada.
Assim que os tecidos são adquiridos, as amostras são cuidadosamente manuseadas e armazenadas para manter a qualidade. A não colocação correta das amostras de tecido no armazenamento pode causar a degradação das células, o que altera os resultados da investigação. A preparação para armazenamento depende normalmente de requisitos específicos, incluindo o tamanho, corte ou objetivo do tecido. Um patologista médico assegura que a amostra é armazenada durante a preparação para garantir que a qualidade permanece intacta.
Se um estudo de amostra for concluído, o tecido é colocado num banco de armazenamento sob a forma de cassete, lâmina ou bloco. Os registos, incluindo a informação do dador, os formulários de consentimento e a data em que o tecido foi recolhido, são mantidos para o caso de as equipas de investigação necessitarem de aceder novamente à amostra de tecido.
Condições de armazenamento de tecidos
Recipientes de armazenamento e tamanho das amostras
Os espécimes de tecido devem ser armazenados em recipientes de armazenamento que sejam estruturalmente estáveis e que garantam a estabilidade a temperaturas muito baixas. A congelação e descongelação das amostras devem ser mantidas a um nível mínimo para evitar a introdução de contaminantes ou a danificação de marcadores biológicos, o que tornaria a análise pouco fiável. Recomenda-se que as amostras de tecido sejam divididas em porções mais pequenas e congeladas em recipientes separados para reduzir estas possibilidades. Não existe um "tamanho mínimo" recomendado para armazenamento. A melhor prática é que a amostra deve ter um tamanho razoável para o espaço de armazenamento e os recursos da instalação.
As prateleiras de alta densidade aumentam a capacidade do armário para armazenamento de cassetes, lâminas de microscópio ou blocos de parafina. A maioria dos laboratórios necessita de mais espaço nos armários para armazenamento de tecidos. Encontrar armários de alta densidade adaptados para deixar pouco espaço desperdiçado é excelente para armazenar tecidos e blocos de parafina. Os armários de alta densidade podem ser ajustados, de modo a que os blocos de parafina sejam empilhados e colocados em armários sem espaço adicional entre si. Os armários de armazenamento adequados estender-se-ão até ao topo de uma sala de armazenamento para evitar o desperdício de espaço em cima. O armazenamento de tecidos através de blocos de parafina num armário facilita o aumento do armazenamento sem complicações.
Temperatura
A temperatura de armazenamento deve ser consistente com a manutenção da integridade celular e a prevenção da degradação. A maioria dos bancos de tecidos armazena espécimes a -70 ℃ ou menos em congeladores ultrafrios, como o Stirling Ultracold SU780XLE ou SU105UE, por períodos mais longos. As amostras de tecido nunca devem ser armazenadas em congeladores de descongelação automática, uma vez que isso fará com que as amostras sofram queimaduras de congelação. As amostras podem ser transportadas em gelo seco ou num congelador ultra-frio portátil, como o ULT25NEU.
